The analysis of triacylglycerols has great importance as quality control and origin determination aid in olive oils analytical methodologies. New improvements in the analysis of triacylglycerols by high-performance liquid chromatography in olive oils are developed in order to increase the separation between LLL/OLLn and OLL/OOLn critical pairs used for detection of seed oils in olive oils. Elution with acetone/acetonitrile (55:45) using gradient temperature and isothermal elution with propionitrile were investigated, in comparison with the European Union official method. The best resolution was achieved using propionitrile at 20ºC. Although the HPLC profile was similar using propionitrile and acetone/acetonitrile, differences in minor triacylglycerols contributing to each HPLC peak were encountered. The precision of the method was good.El análisis de triacilgliceroles tiene gran importancia como herramienta en el control de calidad y en la determinación del origen de los aceites de oliva. Nuevas mejoras en el análisis de triacilgliceroles en aceite de oliva mediante cromatografía líquida de alta eficacia se han desarrollado para mejorar la separación entre las parejas críticas LLL/OLLn y OLL/OOLn usadas en la detección de aceites de semilla en aceite de oliva. Eluciones con acetona/acetonitrilo (55:45) usando gradiente de temperatura y elución con propionitrilo en condiciones isotérmicas han sido investigadas en comparación con el método oficial de la Unión Europea. La mejor resolución se consiguió usando propionitrilo como eluyente a 20ºC. Aunque el perfil cromatográfico obtenido usando propionitrilo fue similar al obtenido usando acetona/acetonitrilo, se encontraron diferencias en los triacilgliceroles minoritarios que contribuyen a cada pico cromatográfico. La precisión del método fue buena.The authors wish to thank the European Commission for the financial support of the project (GRD1-2000-25011; MEDEO).Peer reviewed